體視熒光顯微鏡的常規使用方法

更新時間：2026-06-08

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體視熒光顯微鏡是結合‌體視顯微技術與熒光成像‌的光學儀器，兼具體視顯微鏡的三維立體觀察能力和熒光顯微鏡的特異性標記成像能力，在科研和工業領域應用廣泛。

核心組件分為三部分：

‌熒光濾色片組‌：由激發濾光片、分光鏡和發射濾光片組成，用于篩選特定波長的激發光與發射光，減少雜光干擾。

‌光學成像組件‌：包含物鏡、變倍器和目鏡，總放大倍數可達到1000倍以上。

‌成像系統‌：多采用CCD/CMOS相機采集圖像，現代機型通常配套專業分析軟件，支持三維重建、熒光強度測量、圖像拼接等功能。

開機與設備準備：

取下防塵罩，按下調焦立柱上的電源開關，若只需明場觀察無需開啟熒光光源，若需熒光觀察需額外開啟熒光光源激發器開關。

開啟熒光光源后需要等待‌5~15分鐘預熱‌，待光源發光強度穩定后再開始觀察，點燃紫外燈后15分鐘內不得關閉，關閉后3分鐘內不得再啟動。

根據實驗需求切換到對應熒光濾色片組，比如觀測GFP綠色熒光蛋白需將轉盤撥到對應GFP通道，調整對應的激發/發射濾光參數。

樣本放置與對焦：

將預處理好的樣本放在載物臺中心，調整至物鏡正下方；如果樣本需要固定，可借助橡皮泥壓平保證觀察面平整。

優先使用‌低倍物鏡‌找到樣本目標區域，再切換到高倍物鏡，先粗調焦再微調焦，直到圖像清晰；如果使用油鏡觀察，需要在玻片上加無熒光油，低倍鏡觀察無需添加。

調節雙目目鏡瞳距，調整屈光度環，保證雙眼都能觀察到清晰物像，避免視疲勞。

根據觀察需求調節光源強度，適配落射光/透射光切換，保證熒光亮度適中。

熒光觀察與注意事項：

先在普通光源下定位目標，再切換到熒光模式觀察，避免樣本長時間暴露在紫外光下導致熒光猝滅——FITC標記物在紫外下照射30秒，熒光亮度就會降低50%。

單次觀察時間建議控制在‌1~2小時以內‌，超過90分鐘汞燈發光強度會下降，熒光也會明顯減弱，最長不要超過3小時。

觀察過程中如果長時間不觀測，可臨時關閉熒光快門，延長光源壽命、保護樣本熒光。

如果需要記錄結果，需要及時完成攝影采集，建議使用ASA200以上的高速感光膠片或高靈敏度相機，避免熒光猝滅后無法成像。

關機與整理：

圖像采集完成后，先關閉圖像采集軟件，再關閉設備電源，遵循「先關軟件、后關電源」的順序，避免影響儀器參數設置。

將放大倍數調至最低，降低物鏡高度，取下樣本清理載物臺，給儀器罩上防塵罩，完成使用登記。

如果是更換了新的汞燈燈泡，需要從開始使用就記錄使用時間，方便預估使用壽命及時更換。

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